猪链球菌的分离与鉴定
作者：朱凤才;杨华富;胡晓杼;汪华;王广和;宋亚军 时间：2003-04-30
2000年4月陕西省岐山县种猪繁育场仔猪发生关节炎和败血症，经病原分离、血清学鉴定、致病力试验、保护力试验、细菌回收试验和药敏试验，证实病原为2型猪链球菌。结果表明，引起关节炎的猪链球菌致病力较引起败血症的弱，该菌对头孢菌素和青霉素高度敏感。通过免疫接种和药物治疗，该病得到有效控制。本研究为猪链球菌病的诊断和防治提供了科学依据。
背景概述
猪链球菌是养猪业重要病原体，全球主要养猪国家（美、英、荷等）均有流行。我国自1958年首次报道后，1976年南方多省暴发大规模流行。目前已发现超过30种荚膜型，其中2型猪链球菌于1995年在我国首次鉴定确认。
流行病学特征
- 易感群体：2-6周龄仔猪
- 临床表现：败血症、脑膜炎、关节炎、支气管肺炎
- 传播途径：
- 主要经呼吸道传播
- 病猪分泌物（鼻液/尿液）及未处理病死猪肉为重要传染源
- 流行特点：四季可发（4-10月高发），常呈地方性流行
实验材料与方法
1. 实验材料
| 类别 | 来源/规格 |
|---|---|
| 病料 | 16份（关节液8份+脏器组织8份） |
| 培养基 | 绵羊鲜血平板、匹克氏增菌液等 |
| 血清 | 兽药鉴察所（批号990705） |
| 实验动物 | 健康小白鼠50只（30-35g） |
2. 实验方法
2.1 病原分离流程
graph TD
A[病料涂片镜检] --> B[接种鲜血琼脂]
B --> C[挑取可疑菌落]
C --> D[匹克氏增菌液培养]
D --> E[血清肉汤纯化]2.2 鉴定方法
- 生化试验：10种糖类利用试验
- 血清学鉴定：玻片凝集试验（1/2型及2型抗血清）
- 动物试验：
- 致病力：腹腔注射测定最小致死量
- 保护力：灭活疫苗免疫攻毒试验
2.3 药敏试验
纸片扩散法（7种抗生素）
结果与分析
3.1 病原特征
| 特性 | 观察结果 |
|---|---|
| 菌落形态 | 灰绿色小菌落，β溶血环明显 |
| 染色特性 | 革兰氏阳性，短链/长链排列 |
| 生化反应 | 符合猪链球菌标准（表2） |
3.2 血清学鉴定
所有分离株（3#/8#/13#/15#）均与2型抗血清发生特异性凝集
3.3 致病力差异
| 菌株类型 | 致死率（18h内） | 病理变化 |
|---|---|---|
| 关节炎株 | 0% | 局部脓肿形成 |
| 败血症株 | 100% | 全身败血症病变 |
3.4 药敏结果
敏感等级：
1. 高度敏感：头孢菌素（18.75mm）、青霉素（15.5mm）
2. 中度敏感：洁霉素（13.5mm）、卡那霉素（13.25mm）
3. 耐药：土霉素/链霉素/庆大霉素（<8mm）
防控建议
1. 免疫预防：对健康仔猪接种灭活疫苗
2. 治疗策略：优选头孢菌素/青霉素，配合洁霉素
3. 管理措施：
- 严格隔离病猪
- 加强环境卫生消毒
- 规范病死猪无害化处理
待解决问题
同血清型菌株（关节炎型vs败血症型）致病力差异的分子机制需进一步研究
参考文献
1. 黄毓茂等. 兽医学报, 1995
2. Gottschak M. J Clin Microbio, 1989
3. 蔡宝祥. 家畜传染病学, 1998
4. 甘肃农业大学. 兽医微生物学（第二版）, 1998